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蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB )

标签: western-blot 免疫印迹 蛋白质

蛋白质免疫印迹(Western Blot )可以:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。

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底物化学发光ECL法:

实验方法原理

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。

与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

 

实验材料

蛋白质样品

试剂、试剂盒

丙烯酰胺 SDS  Tris-HCl β-巯基乙醇 ddH2O 甘氨酸 Tris 甲醇 PBS NaCl KCl Na2HPO4 KH2PO4 ddH2O 考马斯亮兰 乙酸 脱脂奶粉 硫酸镍胺 H2O2 DAB试剂盒

仪器、耗材

电泳仪 电泳槽 离心机 离心管 硝酸纤维素膜 匀浆器 剪刀 移液枪 刮棒


Western印迹法:

实验材料

蛋白质样品

试剂、试剂盒

裂解液 PBS G 250考马斯亮蓝溶液 NaCl SDS 上样缓冲液 电泳缓冲液 转移缓冲液 丽春红染液 封闭液 TBST TBS 洗脱抗体缓冲液 显影液 定影液 抗体 化学发光试剂

仪器、耗材

高压锅 玻璃匀浆器 高速离心机 分光光度仪 -20℃低温冰箱 垂直板电泳 转移装置 恒温水浴  摇床 多用脱色摇床



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